VVC患者与健康育龄妇女的阴道微生态比较

　　外阴阴道假丝酵母菌病（volvovaginacandidiasis，VVC）是一种由假丝酵母菌的条件致病菌引起的外阴阴道炎症。有研究显示，VVC是假丝酵母菌在宿主外阴、阴道以及阴道环境相互作用的结果。国外显示约75%的女性一生中患过1次VVC，45%的女性经历过2次及以上的发作。国内14所医院对VVC患者的流行病学的研究发现，妇科门诊患者以阴道炎症最多（31.3%），在阴道炎中VVC又居首位（11.6%）。外阴阴道假丝酵母菌病治疗效果好，但复发率高的问题是一直困扰广大女性的问题。它是一种内源性的难治性疾病。VVC的发生与阴道内环境的变化有着很大的关系。阴道内乳酸杆菌的减少往往是VVC发生的基础，当阴道生态平衡被打破，或有外源性的病原体入侵时，就会导致VVC的发生。所以我们可以通过微生态的指标以及菌群的密集度、多样性来观察VVC与健康人群的差异。现报道如下。

　　材料与方法

　　对象调查2014年4—7月来我院妇科门诊就诊并有较好依从性和易于随访的VVC患者199例，为VVC组。并在同时间段抽取正常健康女性412例，为健康对照组。分析比较2组现病史、既往病史、年龄、诊断等资料。

　　VVC和健康人群的筛选（1）症状：外阴瘙痒，伴有尿痛并性交痛的症状，白带增多。（2）体征：阴道分泌物呈白色豆腐渣样，且外阴潮红、水肿，并伴明显抓痕。（3）实验室检查：阴道分泌物以及微生态由专业医生取到后，送至检验科检查（确保整个过程不受其它外界环境的污染）。记录阴道微生态检查结果。

　　仪器和试剂革兰染液由贝索生物技术有限公司提供；细菌性阴道病联合检测试剂盒由珠海丽珠生物技术有限公司提供；烤片机、染色架、显微镜、孵育仪。

　　标本采集由专业医师用无菌棉拭子自阴道侧壁上1/3处旋转留取阴道分泌物，装入干净隔离的塑料瓶中送检。

　　实验室检查标本运送至检验科后，用烤片机烘干1min固定后，进行革兰染色。（1）初染。将放有涂片标本的染色架放入结晶紫乙醇饱和液缸内，染色约10s，自来水冲洗干净。（2）媒染。将染色架吸干多余水分后，放入碱性碘液缸内，染色约15s，自来水冲洗。（3）脱色。将染色架吸干多余水分后，放入30%丙酮酒精缸内，脱色5～20s，自来水冲洗。（4）复染。将染色架吸干多余水分后，放入碱性复红乙醇饱和液缸内，染色约40s，自来水冲洗干净。（5）烤干。VVC组和健康对照组均行阴道微生态检查。阴道微生态检查方法：先用细菌性阴道病联合检测试剂盒检测pH值、唾液酸酶、过氧化氢和白细胞酯酶；涂片革兰染色后，由显微镜观察VVC组和健康对照组阴道分泌物镜下的形态，包括假丝酵母菌孢子、假菌丝、芽生孢子、细菌群密度、菌群多样性、乳酸杆菌、乳酸杆菌分级、Nugent评分、白细胞、清洁度、线索细胞等并记录。微生态指标如唾液酸酶、pH值同时记录。由于过氧化氢受外界因素影响，白细胞酯酶为破坏白细胞释放的酯酶，仅反映既往炎症状况，均排除本研究。

　　阴道微生态判断标准阴道微生态正常的标准是正常菌群密度和菌群多样性为Ⅱ～Ⅲ级、优势菌为乳酸杆菌、清洁度Ⅰ～Ⅱ度、过氧化氢（乳酸杆菌功能）阴性、白细胞酯酶以及唾液酸酶（厌氧菌指标）阴性、阴道pH＜4.5。

　　微生态指标的判断标准乳酸杆菌分级是根据与其他菌群的消长关系进行分级。Ⅰ级：许多多形乳杆菌，无其他细菌。Ⅱa级：混合菌群，主要为乳杆菌。Ⅱb级：混合菌群，但乳杆菌比例明显减少。Ⅲ级：乳酸菌严重减少或缺失，其它菌群过度生长。Nugent评分为BV诊断的实验室金标准，其诊断方法为：0～3分为正常，4～6分为临界范围，7～10分可诊断BV。菌群密集度是指在油镜下观察每视野平均细菌数，Ⅰ级（＋）1～9个，Ⅱ级（＋＋）10～99个，Ⅲ级（＋＋＋）100～999个，Ⅳ级（＋＋＋＋）细菌聚集成团。菌群多样性表示在油镜下观察辨别每视野细菌种类，Ⅰ级（＋）1～3种细菌，Ⅱ级（＋＋）4～6种细菌，Ⅲ级（＋＋＋）7～10种细菌，Ⅳ级（＋＋＋＋）11种及以上细菌。

　　数据的处理本实验选取菌群密集度、菌群多样性、乳酸杆菌、乳酸杆菌分级、唾液酸酶、Nugent评分、白细胞、清洁度、线索细胞、pH值、年龄这11个指标，以此对比VVC组和正常健康人群的微生态结果差异。将结果进行量化，以便进行统计学的分析。将所有项目结果中的未见和阴性均量化为0，查见和阳性以及弱阳量化为1；线索细胞：未见量化为0，1%～20%为1，＞20%为2；白细胞：0～5个为量化0，5～15个为1，15～30为2，＞30个为3；乳酸杆菌：＜1个量化为0，1～5个/油镜量化为1，6～30个/油镜为2，＞30个/油镜为3；菌群密集度和菌群多样性：Ⅰ级量化为1，Ⅱ级为2，Ⅲ级为3，Ⅳ级为4；乳酸杆菌分级：Ⅰ级量化为1，Ⅱa级为2，Ⅱb级为3，Ⅲ级为4，“无”为0；清洁度：Ⅰ度为1，Ⅱ度为2，Ⅲ度为3，Ⅳ度为4。

　　统计学分析采用SPSS17.0统计软件分析，计算2组数据的均数、标准差。2组间比较用成组资料比较的t检验。

　　结果

　　2组患者年龄和各微生态指标的比较结果详见表1。

　　VVC组和对照组比较，在年龄、菌群密集度、乳酸杆菌、乳酸杆菌分级、唾液酸酶、Nugent评分、白细胞、清洁度、线索细胞方面比较差异有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01），而pH值、菌群多样性方面比较无显著性差异（P＞0.05）。

　　讨论

　　VVC是妇科常见病，容易治疗，但是复发率特别高，也较易转变成复发性外阴阴道假丝酵母菌病（recurrentvulvovaginalcandidiasis，RVVC）。其机理不明确，有学者认为可能VVC的发生与阴道局部微生态环境异常有直接关系。而阴道微生态体系是由阴道内正常菌群、机体内分泌调节和解剖生理结构共同组成，在受到内源性和外源性因素的共同影响时，容易发生改变。正常情况下乳酸杆菌为优势菌，可以黏附与竞争性地排斥假丝酵母菌，分解阴道上皮细胞的糖原产生乳酸降低阴道pH值，产生过氧化氢、细菌素、类菌素、表面活性物质，抑制其他细菌的过度繁殖。乳酸杆菌的减少可致菌群失调，给了其他细菌生长的机会，就会引起相应的阴道炎症，从而使pH值、菌群密集度、过氧化氢、乳酸杆菌等一系列微生态指标发生改变。从而对临床上的诊断有很大的帮助。

　　本次研究发现，2组菌群密集度、乳酸杆菌、乳酸杆菌分级、唾液酸酶、Nugent评分、白细胞、清洁度、线索细胞有显著性差异，说明在VVC患者微生态中菌群密集度、乳酸杆菌、乳酸杆菌分级、唾液酸酶、Nugent评分、白细胞、清洁度、线索细胞存在显著改变。在VVC组与健康对照组的年龄对比中，VVC组显著低于健康对照组，表明低年龄育龄妇女容易感染VVC。而对于VVC患者来说，pH值、菌群多样性与健康妇女无显著性差异，这可能与下列有关：（1）样本量较少，还可以扩大样本量；（2）乳酸杆菌还存留一些功能正常能产酸的杆菌，使其pH值变化不大；（3）乳酸杆菌与假丝酵母菌在一定程度上达到了平衡，从而使阴道内的菌群种类控制在正常范围，没有引起其他细菌的过度生长。（4）由于假丝酵母菌的大量繁殖，控制了阴道内的营养来源，而抑制了其他细菌的生长繁殖。

　　综上所述，VVC患者可以通过阴道微生态检查反映临床上是否治愈或者好转，使阴道微生态成为指导临床医生合理用药的一个重要指标。临床治愈时，有约40%的患者微生态处于紊乱状态，通过积极的恢复阴道微生态环境，复发率可下降2.3%。在VVC患者的治疗过程中通过动态监测微生态的指标变化，临床医生可以根据患者的具体微生态状况而针对性用药，这样既可减轻医生的治疗麻烦又可减轻患者在治疗过程中的痛苦。而对于正常健康育龄妇女，应注重个人卫生，保持阴道微生态平衡，避免VVC的发生。